Produção da proteína recombinante do envelope do vírus da zika no sistema baculovírus-células de inseto
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Universidade Católica do Salvador
A proteína do envelope (E) do vírus da Zika (ZIKV) está envolvida na ligação e fusão com receptores celulares, sendo a principal determinante do tropismo viral, auxilia na virulência e imunogenicidade. Atualmente, não há vacinas anti- ZIKV disponíveis, assim, é prioridade compreender a resposta imune contra ZIKV para controle de uma potencial pandemia. O objetivo principal deste estudo é produzir e purificar a proteína E do ZIKV nas formas de monômero (Em) e dímero (Ed) pelo método baculovírus-célula de inseto. Construções de DNA contendo uma sequência líder de nucleotídeos que codificam um peptídeo sinal do Baculovírus, a proteína precursora de membrana (prM), a proteína Em ou Ed e cauda de seis histidinas foi concebida, subclonada no plasmídeo carreador pFastBacDual e transferida para o cromossoma artificial do Baculovírus recombinante (bacmídeo). Partículas virais foram obtidas pela transfecção de células Sf-9 com o bacmídeo recombinante e usadas para determinar as melhores condições de produção da proteína recombinante em sobrenadante de células High-Five, de acordo com a multiplicidade de infecção (MOI) e tempo de infecção (TOI). As construções que codificam Em e Ed foram geradas com êxito e as condições definidas foram correspondentes a MOI 2 e TOI 72 horas para Em e MOI 5 e TOI 48 horas para Ed. A purificação foi realizada por cromatografia de afinidade, obtendo-se rendimento médio de 6,17 mg por litro de cultivo. As proteínas recombinantes obtidas podem ser testadas como possíveis candidatas ao desenvolvimento de vacinas seguras e eficazes para proteger a população contra surtos de ZIKV